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　　pg电子Apg下载★★◈✿，pg电子游戏平台pg电子第四章 高效液相色谱法 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） §4.1 高效液相色谱分析概述 液相色谱★★◈✿，是以液体溶剂为流动相的色谱方法★★◈✿。经典液相色谱★★◈✿，包括Tswett的工作★★◈✿，都是在直径1-5cm, 长50-500cm的玻璃柱中进行的★★◈✿。为保证有一定的柱流速★★◈✿，填充的固定相颗粒直径多在150-200?m范围内★★◈✿。即使这样★★◈✿，流速仍然很低(1mL/min)★★◈✿，所需分离分析时间很长★★◈✿！ 当加压增加流速(真空或空气泵)时★★◈✿，尽管分析时间减少★★◈✿，但柱塔板高度Hmin也相应增加了★★◈✿，或者说柱效下降了★★◈✿。而由速率理论知★★◈✿：色谱柱板高H几乎正比于固定相平均粒径dp的平方★★◈✿，因此提高柱效最有效的方法★★◈✿，是减小固定相颗粒物的粒径★★◈✿，目前所使用的固定相平均粒径多在3-10 ?m ★★◈✿。 4.1.1 高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较 高压: 一般可达到150?350×105Pa★★◈✿。 高速★★◈✿：HPLC采用高压输液设备★★◈✿，流速大增加★★◈✿，分析速度极快★★◈✿，只需数分钟★★◈✿；而经典方法靠重力加料★★◈✿，完成一次分析需时数小时★★◈✿；一般流动相流速为1?10 mL/min★★◈✿。 高效★★◈✿：填充物颗粒极细且规则★★◈✿，固定相涂渍均匀★★◈✿、传质阻力小★★◈✿，因而柱效很高★★◈✿。可以在数分钟内完成数百种物质的分离★★◈✿。 一般 n 30,000 plates/m★★◈✿。 高灵敏度:１～１０μL★★◈✿，足以完成全分析★★◈✿。 4.1.2 HPLC与GC的比较 §4.2 流程及主要部件 Components Solvent Reservoir and Degassing System Pumps Sample Injection System Columns Temperature Control Detectors 4.2.2 主要部件 (1) 高压输液装置 1）贮液器Solvent Reservoir★★◈✿：1-2L的玻璃瓶★★◈✿，配有溶剂过滤器(Ni合金)★★◈✿，其孔径约2 ?m★★◈✿，可防止颗粒物进入泵内★★◈✿。 注★★◈✿：贮液罐放置位置要高于泵体★★◈✿，以保持一定的输液静压★★◈✿。 密闭★★◈✿。 2）脱气Degassing System★★◈✿：溶剂通过脱气器中的脱气膜★★◈✿，相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去（气泡会影响检测）★★◈✿。 ①吹氦气脱气法 (如★★◈✿：右图)②加热回流法 ③抽真空脱气法 ④超声波脱气法  以上方法均为离线脱气★★◈✿，随溶剂存放时间延长又会有空气进入溶剂★★◈✿。★★◈✿。 ⑤在线真空脱气法 将真空脱气装置串接到贮液罐与高压泵之间★★◈✿，实现溶剂在进入高压泵之前的连续脱气★★◈✿。脱气效果最优★★◈✿。 为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性★★◈✿，必须按照下列注意事项进行操作★★◈✿： ①防止任何固体微粒进入泵体★★◈✿，可采用MILLIPOIPORE滤膜（0.2或0.45）等滤器过滤★★◈✿。泵的入口都应连接砂滤棒（或片）★★◈✿。 ②流动相不应含有任何腐性物质★★◈✿，含有缓冲液的流动相不应保留在柱内面对面视频游戏365★★◈✿，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下★★◈✿。 ③泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完★★◈✿。 ④输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力★★◈✿，否则会使高压密封环变形★★◈✿，产生漏液★★◈✿。 ⑤流动相应该先脱气★★◈✿，以免在泵内产生气泡★★◈✿，影响流量的稳定性如果有大量气泡★★◈✿，泵就无法正常工作★★◈✿。 4）梯度淋洗装置 gradient elution 内梯度: 利用两台高压输液泵★★◈✿，将 两种不同极性的溶剂按一定的 比例送入梯度混合室★★◈✿，混合后 进入色谱柱★★◈✿。 外梯度: 一台高压泵, 通过比例调 节阀★★◈✿，将两种或多种不同极性 的溶剂按一定的比例抽入高压 泵中混合★★◈✿。 梯度洗脱的特点★★◈✿： 优点★★◈✿： 单位时间的分离能力增加 检测灵敏度提高 缺点★★◈✿： 仪器设备要求高 不适合某些检测方式 柱需再生 定量分析的重复性较低 梯度洗脱的可变参数★★◈✿： A液和B液的成分和化学特性 梯度的陡度和变化形状 纵坐标:B% 横坐标:时间 (2) 进样装置 隔膜进样★★◈✿。用微量注射器将样品注入专门设计的与色谱柱相连的进样头内★★◈✿，样品直接送到柱头填充床的中心★★◈✿，死体积几乎等于零★★◈✿，进样重复性只能达到1～2％★★◈✿； 停流进样★★◈✿：打开流动相泄流阀★★◈✿，使柱前压力下降面对面视频游戏365★★◈✿，进样后★★◈✿，关闭阀门使流动相压力恢复★★◈✿。 可避免在高压下进样★★◈✿。但在HPLC中由于隔膜的污染★★◈✿，停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”★★◈✿；另一缺点是保留时间不准★★◈✿。 高压定量进样阀★★◈✿： 由圆形密封垫子（转子）和固定底座（定子）组成★★◈✿。由于阀接头和连接管死体积存在★★◈✿，柱效率低于隔膜进样（约下降5～10％左右）面对面视频游戏365★★◈✿，但耐高压（35～40MPa）★★◈✿，进样量准确★★◈✿，重复性好（0.5％）★★◈✿，操作方便★★◈✿。 自动进样器 用于大量样品的常规分析 (3) 高效分离柱 色谱柱按用途分为分析型和制备型两类, 尺寸规格也不同: ①常规分析柱(常量柱), 内径2-5mm(常量4.6mm,国内又4mm和5mm),柱长10～30CM★★◈✿； ②窄径柱（NARROWBORE★★◈✿，又称细管径柱★★◈✿、半微柱SEMI－MICROCOLUMN）★★◈✿，内径1～2MM★★◈✿，柱长10～20CM★★◈✿； ③毛细管柱（又称微柱MICROCOLUMN）★★◈✿，内径0.2～0.5MM★★◈✿； ④半制备柱★★◈✿，内径5MM★★◈✿； ⑤实验室制备柱★★◈✿，内径20～40MM★★◈✿，柱长10～30CM★★◈✿； (4) 液相色谱检测器 a. 紫外检测器 应用最广★★◈✿，对大部分有机化合物有响应pg电子Apg★★◈✿。 特点★★◈✿： 灵敏度高★★◈✿； 线形范围高★★◈✿； 流通池可做的很小（1mm×10mm★★◈✿，容积 8μL）★★◈✿； 对流动相的流速和温度变 化不敏感★★◈✿； 波长可选★★◈✿，易于操作★★◈✿； 可用于梯度洗脱★★◈✿。 b. 光电二极管阵列检测器photo－diode－array detector（PDAD★★◈✿，PDA, DAD） 紫外检测器的重要进展★★◈✿；钨灯和氘灯组合光源★★◈✿，进入检测池的不是单色光★★◈✿，而是一段紫外波长上的光★★◈✿。 光电二极管阵列检测器 任意一束光由一种介质射入另一种介质时★★◈✿，由于两种介质的折射率不同而发生折射现象 溶液的折射率等于溶剂及其中所含各组分溶质的折射率与其各自的摩尔分数的乘积之和★★◈✿。 除紫外检测器之外应用最多的检测器★★◈✿；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值★★◈✿。差值与浓度呈正比★★◈✿； 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）★★◈✿；灵敏度低★★◈✿、对温度敏感★★◈✿、不能用于梯度洗脱★★◈✿。 d. 荧光检测器（Fluorescence Detector） 许多有机化合物★★◈✿，特别是芳香族化合物★★◈✿、生化物质★★◈✿，如有机胺★★◈✿、维生素★★◈✿、激素★★◈✿、酶等★★◈✿，被一定强度和波长的紫外光照射后★★◈✿，发射出较激发光波长要长的荧光★★◈✿。荧光强度与激发光强度★★◈✿、量子效率和样品浓度成正比★★◈✿。 有的有机化合物虽然本身不产生荧光★★◈✿，但可以与发荧光物质反应衍生化后检测★★◈✿。 高灵敏度★★◈✿、高选择性★★◈✿； 蒸发光散射检测器（通用型★★◈✿、质量型★★◈✿、破坏型） ELSD较 UV的优点 能解决最困难的HPLC检测问题★★◈✿，对于磷脂★★◈✿、皂苷★★◈✿、糖类★★◈✿、聚合物★★◈✿、树脂等无紫外吸收和紫外末端吸收及紫外吸收系数很小的化合物均有响应★★◈✿。 无流动相和杂质的紫外吸收干扰★★◈✿，提供了检测灵敏度和色谱峰的分辨★★◈✿。 f. 电导检测器（conductivity detector, CD） 原理★★◈✿： 基于离子性物质的溶液具有导电性★★◈✿，其电导率与离子的性质和浓度相关pg电子Apg★★◈✿。 电导检测器是离子色谱中必备的检测器★★◈✿。 1★★◈✿、流动相类别 按流动相组成分★★◈✿：单组分和多组分★★◈✿； 按极性分★★◈✿：极性★★◈✿、弱极性★★◈✿、非极性★★◈✿； 按使用方式分★★◈✿：固定组成淋洗和梯度淋洗★★◈✿。 常用溶剂★★◈✿：己烷★★◈✿、四氯化碳面对面视频游戏365★★◈✿、甲苯★★◈✿、乙酸乙酯★★◈✿、乙醇★★◈✿、乙腈★★◈✿、水面对面视频游戏365★★◈✿。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性★★◈✿，以改进分离或调整出峰时间★★◈✿。 2★★◈✿、流动相选择 在选择溶剂时★★◈✿，溶剂的极性是选择的重要依据★★◈✿。 采用正相液-液分配分离时★★◈✿：首先选择中等极性溶剂★★◈✿，若组分的保留时间太短★★◈✿，降低溶剂极性★★◈✿，反之增加★★◈✿。也可在低极性溶剂中★★◈✿，逐渐增加其中的极性溶剂★★◈✿，使保留时间缩短★★◈✿。 常用溶剂的极性顺序★★◈✿： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) 注意★★◈✿： a．由于甲醇廉价★★◈✿，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)★★◈✿。 b．对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相★★◈✿。 c．用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧) ★★◈✿。 d．含水流动相最好在实验前配制★★◈✿。 e．流动相要求使用滤膜过滤★★◈✿，除去微粒杂质★★◈✿。F. 使用HPLC级溶剂配制流动相★★◈✿，延长色谱柱的使用寿命★★◈✿，提高柱性能★★◈✿。 3★★◈✿、柱填料 （l）硅酸酯（≡Si一OR）键合固定相 醇与硅醇基发生酯化反应★★◈✿： 由于这类键合固定相的有机表面是一些单体★★◈✿，具有良好的传质特性pg电子Apg★★◈✿，但这些酯化过的硅胶填料易水解且受热不稳定★★◈✿，因此仅适用于不含水或醇的流动相★★◈✿。 （2）≡Si一N共价键合固定相先用酰氯将硅羟基氯化★★◈✿，再与氨基化合物反应 （3）≡Si一C 共价键合固定相 键合相类型 a★★◈✿、流动相方面 除去微粒 纯度的要求 流动相对样品的溶解度 流动相流速的选择★★◈✿： ???? 对于一根特定的色谱柱★★◈✿，要追求最佳柱效★★◈✿，最好使用最佳流速★★◈✿。对内径为4.6mm的色谱柱★★◈✿，流速一般选择1ml／minpg电子Apg★★◈✿，对于内径为4.0mm柱★★◈✿，流速0.8ml／min为佳★★◈✿。  b★★◈✿、 色谱柱的清洗 对所做的样品要有充分的了解 用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗 反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的★★◈✿，确保所使用的流动相和乙腈/水互溶★★◈✿。在用流动相分析样品之前★★◈✿，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱★★◈✿；如果所使用的流动相中含有缓冲盐★★◈✿，应注意用纯水“过渡”★★◈✿。 硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的★★◈✿。如果该色谱柱需要使用含水的流动相★★◈✿，在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡. §4.4 主要分离类型与原理 4.4.1 液-固吸附色谱 （Liquid-Solid Adsorption Chromatography） 固 定 相★★◈✿：固体吸附剂为★★◈✿，如硅胶★★◈✿、氧化铝等★★◈✿，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂★★◈✿。 流 动 相★★◈✿：各种不同极性的一元或多元溶剂★★◈✿。 基本原理★★◈✿：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸★★◈✿；适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样★★◈✿，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性. 分离机理★★◈✿：基于样品极性的差异★★◈✿。 洗脱次序∶一般为正相★★◈✿，即★★◈✿：极性低的先被洗脱★★◈✿。 缺 点★★◈✿：非线形等温吸附常引起峰的拖尾★★◈✿。 4.4.2 液-液分配色谱 （Liquid- Liquid Partition Chromatography） 固定相与流动相均为液体（互不相溶）★★◈✿； 基本原理★★◈✿：组分在固定相和流动相上的分配★★◈✿； 流 动 相★★◈✿：对于亲水性固定液★★◈✿，采用疏水性流动相★★◈✿，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase）★★◈✿，反之★★◈✿，流动相的极性大于固定液的极性（反相reverse phase）★★◈✿。正相与反相的出峰顺序相反★★◈✿； 固 定 相★★◈✿：早期涂渍固定液★★◈✿，固定液流失★★◈✿，较少采用★★◈✿； 化学键合固定相★★◈✿：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶 （担体）表面的游离羟基上★★◈✿。C-18柱（反相柱）★★◈✿。 4.4.3 离子交换色谱 （Ion-exchange Chromatography） 固 定 相★★◈✿：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂★★◈✿； 流 动 相★★◈✿：阴离子离子交换树脂作固定相★★◈✿，采用碱性水溶液★★◈✿；阳离子离子交换树脂作固定相★★◈✿，采用酸性水溶液★★◈✿；控制pH 基本原理★★◈✿：组分在固定相上发生的反复离子交换反应★★◈✿；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径★★◈✿、电荷★★◈✿、存在形式等有关★★◈✿。亲和力大★★◈✿，保留时间长★★◈✿； 应 用★★◈✿：离子及可离解的化合物★★◈✿，氨基酸★★◈✿、核酸等★★◈✿。 分离阴离子 分离阳离子 4.4.4 离子色谱 （Ion Chromatography） 离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一种技术★★◈✿，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的★★◈✿、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料★★◈✿，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器pg电子Apg★★◈✿，是测定混合阴离子的有效方法★★◈✿。 99%半导体级异丙醇中痕量阴离子分析 4.4.5 离子对色谱 （Ion Pair Chromatography） 原理★★◈✿：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物★★◈✿，使其能够在两相之间进行分配★★◈✿； 阴离子分离★★◈✿：常采用烷基铵类★★◈✿，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子★★◈✿； 阳离子分离★★◈✿：常采用烷基磺酸类★★◈✿，如己烷磺酸钠作为对离子★★◈✿； 反相离子对色谱★★◈✿：非极性的疏水固定相(C-18柱)★★◈✿，含有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相★★◈✿，试样离X-进入流动相后★★◈✿，生成疏水性离子对Y+X -后★★◈✿；在两相间分配★★◈✿。 离子对色谱机理 4.4.6 排阻色谱色谱 （Size-exclusion Chromatography） 固定相★★◈✿：凝胶(具有一定大小孔隙分布)★★◈✿； 原 理★★◈✿：按分子大小分离★★◈✿。 小分子可以扩散到凝胶空隙★★◈✿，出峰最慢★★◈✿； 中等分子只能通过部分凝胶空隙★★◈✿，中速通过★★◈✿； 而大分子被排斥在外★★◈✿，出峰最快★★◈✿； 溶剂分子小★★◈✿，故在最后出峰★★◈✿。 全部在死体积前出峰★★◈✿； 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离★★◈✿。 凝胶过滤色谱（gel filtration chromatography, GFC）★★◈✿： 以水或缓冲溶液作流动相的凝胶色谱法★★◈✿。主要适合于水溶性高分子的分离★★◈✿。凝胶渗透色谱（gel permeation chromatography, GPC）★★◈✿： 以有机溶剂作流动相的凝胶色谱法★★◈✿。主要适合于脂溶性高分子的分离★★◈✿。如甲苯和四氢呋喃能很好地溶解合成高分子★★◈✿，所以GPC主要用于合成高分子的分子量（分布）的测定★★◈✿。 4.4.7 亲和色谱(AC) （Affinity Chromatograph） 原理★★◈✿：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力★★◈✿，进行选择性分离★★◈✿。 4.4.8 高效液相色谱分离类型的选择 水溶性样品 反相色谱法（溶于水） 离子交换色谱法★★◈✿、离子对色谱法或离子色谱法（溶于酸或碱性溶液） 非水溶性样品 液—固吸附色谱（可溶于烃类） 正相色谱和吸附色谱（溶于二氯甲烷或氯仿） 反相色谱（溶于甲醇等） 吸附色谱（异构体） 正相或反相色谱（同系物） 空间排阻色谱（溶于水或非水溶剂★★◈✿，分子大小有差别） HPLC的应用举例application of HPLC 2. 稠环芳烃的分析 § 4.6 制备型液相色谱 （preparative liquid chromatography） 获得高纯物质（色谱纯）的有效方法★★◈✿。结构与分析型一样★★◈✿，但泵流量大★★◈✿、 进样量大★★◈✿、采用制备柱★★◈✿；柱后馏分收集器 半制备柱: 内径8mm★★◈✿，长度15～30cm 制备柱★★◈✿：内径20～50mm★★◈✿，柱长50cm★★◈✿。 2. 液相制备色谱的方法 收集组分时★★◈✿，通常有以下情况★★◈✿： （1）可获得良好分离★★◈✿，主峰使用制备柱pg电子Apg★★◈✿，超载提高效率★★◈✿； （2）两主成分之间的小组分★★◈✿；超载★★◈✿，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后★★◈✿，再次分离制备★★◈✿。 4.7★★◈✿、高效毛细管电泳基本原理 2.高效毛细管电泳技术上的重要突破 3.电泳现象与电渗流现象 4. 分离过程 思考题 1．现需分离分析一氨基酸试样★★◈✿，拟采用哪种色谱？ 2．提高液相色谱中柱效的最有效途径是什么？ 3. 何谓反相液相色谱？何谓正相液相色谱？ 4. 在液相色谱法中★★◈✿，梯度淋洗适用于分离何种试样？ 5. 在液相色谱中★★◈✿，范氏方程中的哪一项对柱效能的影响可以忽 略不计？ 6. 对下列试样★★◈✿，用液相色谱分析★★◈✿，应采用何种检测器★★◈✿： （l）长链饱和烷烃的混合物 （2）水源中多环芳烃化合物★★◈✿。 7. 对聚苯乙烯相对分子质量进行分级分析★★◈✿，应采用哪一种液相色谱法？ 8．什么是化学键合固定相？它的突出优点是什么？ 9．什么叫梯度洗脱？它与气相色谱中的程序升温有何异同？ 10.指出下列各种色谱法★★◈✿，最适宜分离的物质★★◈✿。 （l）气液色谱★★◈✿；(2) 正相色谱★★◈✿；（3）反相色谱★★◈✿；（4）离子交换色谱;（5）凝胶色谱★★◈✿；(6）气固色谱★★◈✿； (7）液固色谱★★◈✿。 超声波工作原理★★◈✿： 由超声波发生器发出的高频振荡信号★★◈✿，通过换能器转换成高频机械振荡而传播到介质面对面视频游戏365★★◈✿，清洗溶剂中超声波在清洗液中疏密相间的向前辐射★★◈✿，使液体流动而产生数以万计的微小气泡★★◈✿，存在于液体中的微小气泡在声场的作用下振动,当声压达到一定值时★★◈✿，气泡迅速增大★★◈✿，然后突然闭合★★◈✿，在气泡闭合时产生冲击波★★◈✿，在其周围产生上千个大气压★★◈✿，破坏不溶性污物而使他们分散于清洗液中★★◈✿。 硅胶型★★◈✿、聚苯乙烯型★★◈✿、葡聚糖凝胶型…… 空间排斥（阻）色谱 Size Exclusion Chromatography M.W. tR M.W. tR M.W. tR M.W. tR M.W. tR 各种色谱法的比较 方 法 项 目 吸附色谱 分配色谱 离子色谱 排阻色谱 亲合色谱 固定相 全多孔固体吸附剂 键合在基体上的键合相基团 高效微粒离子交换剂 具有不同孔径的多孔凝胶 键联在基体上的特异配位体 流动相 不同极性有机溶剂 不同极性有机溶剂和水 不同pH的缓冲溶液 有机溶剂或一定pH缓冲液 可加改性剂的pH缓冲液 分离原理 吸附?解吸 溶解?挥发 可逆性离子交换 多孔秒凝胶的渗透或过滤 钥匙结构络合物可逆性离解 平衡常数 吸附系数KA 分配系数KP 选择性系数KS 分布系数KD 稳定常数KC 主要应用 中等分子量的脂溶性化合物 大多数的化合物的分离与分析 离子型化合物的分离与分析 大分子的化合物的分离和分子量测定 生物活性物质的分离与分析 色谱分离模式的选择 样品 分子量小 于2000 分子量大 于2000 溶于水 溶于有 机溶剂 非离子化 离子化 RP IP IC GF RP 溶于己烷等 溶于甲醇等 NP AC RP GPC 溶于水 溶于有 机溶剂 RP IC GF GPC AC★★◈✿：吸附色谱★★◈✿，NP★★◈✿：正相色谱★★◈✿，RP★★◈✿：反相色谱★★◈✿，IP★★◈✿：离子对色谱★★◈✿， IC★★◈✿：离子色谱★★◈✿，GPC★★◈✿：凝胶渗透色谱GF★★◈✿：凝胶过滤色谱 1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相★★◈✿：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相★★◈✿：正己烷 流 速★★◈✿：1.5 mL/min 色谱柱★★◈✿：50cm?2.5mm(内径) 检测器★★◈✿：差示折光检测器 可对水果★★◈✿、蔬菜中的农药残留量进行分析★★◈✿。 稠环芳烃多为致癌物质面对面视频游戏365★★◈✿。 固定相★★◈✿：十八烷基硅烷化键合相 流动相★★◈✿：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线mL/min 柱 温★★◈✿：50 oC 柱 压★★◈✿：70 ?104 Pa 检测器★★◈✿：紫外检测器 1. 色谱柱的柱容量（柱负荷） 对分析柱★★◈✿：不影响柱效时的最大进样量★★◈✿； 对制备柱★★◈✿：不影响收集物纯度时的最大进样量★★◈✿； 超载★★◈✿：进样量超过柱容量★★◈✿。柱效迅速下降★★◈✿，峰变宽★★◈✿。 超载可提高制备效率★★◈✿，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜★★◈✿。 在电解质溶液中★★◈✿，位于电场中的带电离子在电场力的作用下★★◈✿，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象★★◈✿，称之为电泳★★◈✿。由于不同离子所带电荷及性质的不同★★◈✿，迁移速率不同可实现分离★★◈✿。 1.经典电泳分离法的不足 所用分离柱的柱径大★★◈✿，柱较短★★◈✿，分离效率不高（远低于HPLC）★★◈✿，温度影响大★★◈✿。 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进★★◈✿。 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进★★◈✿： 一是采用了0.05mm内径的毛细管★★◈✿； 二是采用了高达数千伏的电压★★◈✿。 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发★★◈✿，大大减小了温度效应★★◈✿，使电场电压可以很高★★◈✿。 电压升高★★◈✿，电场推动力大★★◈✿，又可进一步使柱径变小★★◈✿，柱长增加★★◈✿。 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱★★◈✿，理论塔板数高达几十万块/米★★◈✿，特殊柱子可以达到数百万★★◈✿。 电泳现象★★◈✿： 带电离子在电场作用下的迁移★★◈✿，速度ν电泳 电渗流现象★★◈✿：玻璃表面存在硅羟基, pH3时, 形成双电层★★◈✿，在高电场的作用下引起柱中的溶液整体向负极移动★★◈✿，速度ν电渗流★★◈✿。 电场作用下★★◈✿，柱中出现★★◈✿：电泳现象和电渗流现象★★◈✿。 带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流两种速度的矢量和★★◈✿。 正离子★★◈✿：两种效应的运动方向一致★★◈✿，在负极最先流出★★◈✿； 中性粒子无电泳现象★★◈✿，受电渗流影响★★◈✿，在阳离子后流出★★◈✿； 阴离子★★◈✿：两种效应的运动方向相反★★◈✿，ν电渗流 ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离面对面视频游戏365★★◈✿。 示差折光检测器 通用型 浓度型 非破坏型 （ Differential Refractive Index Detector） 雾化★★◈✿：色谱柱流出物经过针头式的细导管进入雾化器★★◈✿，与气体混合喷成均匀一致的雾滴★★◈✿。 蒸发★★◈✿：雾滴经过加热的漂移管★★◈✿，流动相被蒸发★★◈✿，溶质形成极细的颗粒★★◈✿。 检测★★◈✿：溶质颗粒气流在检测池发生散射作用★★◈✿，经光电倍增管成电信号输出 Evaporate Light Scattering Detector 原理★★◈✿：利用在一定条件下粒子的数量不变★★◈✿，光散射强度正比于由溶质浓度决定的粒子大小而进行测量的★★◈✿，又成为蒸发型质量检测器★★◈✿。(不符合朗伯－比尔定律） The Source of Health ELSD的缺点 样品组分须为非挥发性或半挥发性的★★◈✿，流动相是易挥发的溶剂★★◈✿。 流动相中如含有缓冲溶液★★◈✿，缓冲液必须具有挥发性★★◈✿，并且浓度要低★★◈✿，例如★★◈✿，甲酸★★◈✿、乙酸★★◈✿、磷酸氢二铵★★◈✿。（与MS类似） 4.3 液相色谱的流动相和固定相 1）基质材料 ① 无机基体★★◈✿：硅胶★★◈✿、氧化铝★★◈✿、氧化锆和二氧化钛等 ② 交联聚合物★★◈✿：聚合物填料多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等★★◈✿，其重要优点是在pH值为1—14均可使用★★◈✿。 ③ 复合材料★★◈✿：无机基体复合一层聚合物 硅胶和硅基仍是目前最广泛应用的液相色谱柱填料★★◈✿。此外还有高分子多孔微球★★◈✿、高疏水表面的多孔碳★★◈✿、无机金属氧化物等★★◈✿。 2）键合固定相 （为什么要键合？） 采用硅胶表面键合技术, 对硅胶微粒表面进行修饰---硅烷化, 使得硅胶表面带有不同的功能团, 以适应不同的分离需要pg电子Apg★★◈✿。目前在色谱填料中, 键合相约占78%(其中C18占反相色谱的72%), 硅胶约占10%★★◈✿。 共价键健合固定相不易水解★★◈✿，并且热稳定较硅酸酯好★★◈✿。缺点是格氏反应不方便★★◈✿；当使用水溶液时★★◈✿，必须限制pH在4～8范围内. （4）硅烷化（≡Si—O－Si－C）键合固定相 这类键会固定相具有热稳定好★★◈✿，不易吸水★★◈✿，耐有机溶剂的优点★★◈✿。能在70℃以下★★◈✿，pH=2～8范围内正常工作★★◈✿，应用较广泛. 烷基★★◈✿：C1★★◈✿、C2★★◈✿、C3★★◈✿、C4(Butyl)★★◈✿、C6★★◈✿、C8(MOS)★★◈✿、C12★★◈✿、C16★★◈✿、C18(ODS)★★◈✿、C22等反相柱★★◈✿；非极性键合相的烷基链长对样品容量★★◈✿、溶质的保留值和分离选择性都有影响★★◈✿，一般来说★★◈✿，样品容量随烷基链长增加而增大★★◈✿，且长链烷基可使溶质的保留值增大★★◈✿，并常常可改善分离的选择性★★◈✿；但短链烷基键合相具有较高的覆盖度★★◈✿，分离极性化合物时可得到对称性较好的色谱峰★★◈✿。 苯基★★◈✿：C6H5-, 含有?-?相互作用★★◈✿； 氰基★★◈✿：-(CH2)3-CN, 带有给电子作用★★◈✿、羟基的氢键作用★★◈✿； 氨基★★◈✿：-(CH2)3-NH2, 弱阴离子型键合相★★◈✿，氨基能与糖类分子中的羟基产生选择性相互作用, 可用于糖分析★★◈✿。 其它极性键合相还有★★◈✿：二醇基Lichrosorb DIOL★★◈✿；硝基Nucleosil-NO2★★◈✿；二甲胺基Nucleosil-NMe2等★★◈✿。 4★★◈✿、色谱柱的保养 随着样品在固定相上的吸附能力由大到小 在色谱柱上的保留由长到短 正相色谱 低极性流动相 反相色谱 高极性流动相 中等极性流动相 中等极性流动相 时间 时间 时间 时间 待测物极性★★◈✿：ABC 正★★◈✿、反相色谱中★★◈✿，极性和保留时间的关系 ＳＯ４２－ ＣＯ３２－ ＣＯ３２－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＳＯ４２－ ＣＯ３２－ ＳＯ４２－ ＣＯ３２－ ＣＯ３２－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ Ｃｌ－ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ Ｃｌ－ ＨＣＯ３－ ＣＯ３２－ ＣＯ３２－ ＣＯ３２－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＣＯ３２－ ＳＯ４２－ ＨＣＯ３－ Ｃｌ－ ＳＯ４２－ Ｃｌ－ ＨＣＯ３－ ＣＯ３２－ ＣＯ３２－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＣＯ３２－ ＣＯ３２－ ＣＯ３２－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ Temporal course 离子交换分离机理 ＣＯ３２－ ＨＣＯ３－ ＣＯ３２－ ＨＣＯ３－ ＣＯ３２－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＣＯ３２－ ＨＣＯ３－ ＣＯ３２－ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＨＣＯ３－ ＳＯ４２－ ＣＯ３２－ ＣＯ３２－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ ＨＣＯ３－ Ｃｌ－ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ Column ★★◈✿： IonPac AG12A / AS12AEluent ★★◈✿： 2.7mM Na2CO3 0.3mM NaHCO3Flow rate★★◈✿： 1.2mL/min Detection★★◈✿： Conductivity (ASRS Recycle mode) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 Retention time(min) 0 8 mS F- NO3- SO42- Cl- NO2- Br- HPO42- Column :IonPac CS12A, CG12A Eluent : 20 mM Methanesulfonic acid Flow rate :1.0 mL/min Detection :Conductivity （CSRS Recycle mode) 0 2 4 6 8 10 12 14 Retention time (min) 0 1 2 3 4 Na+ NH4+ K+ Mg2+ Ca2+ μS 废液 Back Ground★★◈✿： Na2CO3 / NaHCO3 (700μS) NaF,NaCl,NaNO3 Na2HPO4,Na2SO4 ～ ～ Retention time Conductivity NaF NaCl NaNO3 Na2HPO4 Na2SO4 Back Ground★★◈✿： Na2CO3 / NaHCO3 (700μS) ～ ～ Retention time Conductivity HF HCl HNO3 H3PO4 H2SO4 Retention time Back Ground★★◈✿： H2CO3 (15μS) Conductivity 安装在电导池之前 提高待测离子的电导率★★◈✿： 提高灵敏度 Na+,Cl-H+,Cl- 降低背景电导 (淋洗液) : 减少噪音 Na+,HCO3-H2CO3 Na+,OH-H2O 抑制器的作用 Columns: IonPac? AG9-HC, AS9-HC, 2 mm Concentrator Column: IonPac?AG9-HC, 4 mm Eluent: 8.0 mM Sodium carbonate 1.5 mM Sodium hydroxideEluent Flow Rate: 0.25 mL/minRinsing Flow Rate: 2.0 mL/min Sample Volume: 5.0 mL Detection: Suppressed conductivity, ASRS-ULTRA, AutoSuppression? external water mode Peaks: 1. Chloride 5.18 μg/L 2. Carbonate — 3. Nitrate 5.69 4. Sulfate 4.60 5. Phosphate 4.33 30 0 5 10 15 20 25 Minutes 0 1 μS 2 3 4 1 5 * * 液相色谱仪（1） 四高一广 色谱图 斑点 棒式图 实验结果 高灵敏度,自动化 连续检测 显色 收集馏分检测 检测和定量 快速分离,重现性好 高压泵 表面张力 重力 溶液流动 准确 进样器 点样 人工加样 进样 HPLC 优势 HPLC TLC 经典LC 特性 表 三种不同形式液相色谱的这样特征 4.2.1 流程 HPLC仪器包括★★◈✿： 高压输液装置; 进样系统; 分离系统; 检测系统; 此外还配有梯度淋洗★★◈✿、自动进样和数据处理装置★★◈✿。 3）高压输液泵 pumps 压力★★◈✿：150～350×105 Pa 经过初步分离★★◈✿，一般可能得到3种分离色谱图★★◈✿：① 前半部峰重叠★★◈✿，后半部峰分离度过大★★◈✿，保留时间太长★★◈✿； 可选择线形梯度★★◈✿，或凹形梯度★★◈✿。② 前半部分离良好★★◈✿，后半部峰重叠★★◈✿； 可选择凸形梯度★★◈✿。③ 前后两部分分离良好★★◈✿，中间部分峰重叠★★◈✿。 可选择折线梯度★★◈✿。 检测器是液相色谱仪的关键部件之一★★◈✿。对检测器的要求是★★◈✿：灵敏度高★★◈✿，重复性好★★◈✿、线性范围宽★★◈✿、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等★★◈✿。 溶质型检测器★★◈✿，它仅对被分离组分的物理或物理化学特性有响应★★◈✿。属于此类检测器的有紫外★★◈✿、荧光★★◈✿、电化学检测器等★★◈✿； 总体检测器★★◈✿，它对试样和洗脱液总的物理和化学性质响应★★◈✿。属于此类检测器有示差折光检测器等★★◈✿。 电学和电化学检测器★★◈✿： 安培检测器 电导检测器 库仑检测器 介电常数检测器 极谱检测器 热学性质★★◈✿： 光声检测器 热透镜和光热偏转检测器 光学性质检测器★★◈✿： 紫外－可见光检测器 示差折光检测器 荧光检测器 蒸发光散射检测器 化学发光检测器

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